INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CIUDAD ALTAMIRANO
UNIDAD IV
TAREA: EXPERIMENTOS MESELSON Y STAHL
ALUMNA: ELIDENE PEREZ QUINTANA
Vlll SEMESTRE
N. CONTROL: 08930129
MATERIA: BIOLOGIA MOLECULAR
MAESTRO: FRANCISCO JAVIER PUCHE ACOSTA
Introducción:
Meselson
y Stahl (1957) diseñaron un experimento para tratar de averiguar la forma en la
que se realiza la replicación del ADN en E. coli durante estas 14
generaciones el ADN de las bacterias las bacterias se había sintetizado con
bases nitrogenadas con Nitrógeno pesado (N15). Posteriormente,
comprobaron que podían distinguir el ADN del las bacterias que crecían en un
medio normal (con N14) del ADN de las bacterias que habían crecido
durante 14 generaciones en N15. Para ello extrajeron el ADN de ambos
tipos de bacterias y lo centrifugaron en un gradiente de densidad de CsCl.
El resultado fue que la densidad del ADN de
las bacterias que habían crecido en presencia de N15 era mayor que
el ADN de las bacterias que habían crecido con N14. Una vez
comprobado que eran capaces de distinguir el ADN de ambos tipos de bacterias,
continuaron el experimento de la siguiente forma: Las bacterias que habían
estado creciendo en Nitrógeno pesado (N15) las pasaron a un medio de
cultivo que contenía N14 (Nitrógeno normal) y a distintos tiempos,
media generación, una generación, dos generaciones, tres generaciones de
replicación, tomaban una muestra del cultivo bacteriano, extraían el ADN y
centrifugaban en gradiente de densidad de CsCl.
Desarrollo:
Meselson-Stahl fue un experimento realizado en 1957 por Matthew
Meselson y Franklin Stahl en el que se demostró que la replicación de ADN era semiconservadora.
Una replicación semiconservadora es aquella en que la cadena de dos filamentos
en hélice del ADN se replica de forma tal que cada una de las dos cadenas de ADN formadas consiste en
un filamento proveniente de la hélice original y un filamento nuevo
sintetizado.
El experimento permitió confirmar las teorías de James Watson
y de Francis Crick
sobre el método de replicación del ADN.
Hipótesis:
Para investigar la forma de replicación del ADN, Meselsohn y Stahl
idearon una forma muy ingeniosa que se basa en dos premisas fundamentales, por
una parte está el hecho de que el nitrógeno
es uno de los principales elementos del ADN, y por la otra el nitrógeno posee
dos isótopos que pueden ser distinguidos mediante técnicas de laboratorio.
Experimento:
Cuando extraían el ADN de la
bacterias que llevaban una generación creciendo en N14 y centrifugaban en CsCl,
obtenían una sola banda de densidad intermedia (N14-15)entre la del
ADN N14 y el ADN N15. Si extraían el ADN de las bacterias
que llevaban dos generaciones creciendo en N14 y centrifugaban en
gradiente de CsCl obtenían dos bandas, una correspondiente al ADN N14
y otra de densidad intermedia (N14-15) entre la del ADN N14
y el ADN N15. La absorbancia a 260 nm es directamente proporcional a
la cantidad de ADN que contiene una banda, de manera que al medir la
absorbancia de las dos bandas obtenidas en la segunda generación, obtenían que
ambas contenían igual cantidad de ADN (1:1). Al extraer y centrifugar en CsCl el
ADN de las bacterias que llevaban tres generaciones creciendo en N14, obtenían
dos bandas, una correspondiente al ADN N14 y otra de densidad
intermedia (N14-15) entre la del ADN N14 y el ADN N15.
La cantidad de ADN que contenía la banda correspondiente al ADN N14
era tres veces mayor que la encontrada en la banda de densidad intermedia (N14-15),
proporción (3:1).
Los resultados obtenidos por
Meselson y Stahl (1958) se ajustaban a un modelo de replicación
semiconservativo. Para asegurarse, aislaron la banda de ADN de densidad
intermedia (N14-15) obtenida a partir de las bacterias que llevaban
una generación en N14, desnaturalizaron el ADN de la banda mediante
calor para separar sus dos hélices y, manteniéndolas desnaturalizadas,
centrifugaron en CsCl. Si la replicación de E. coli se ajustaba al
modelo semiconservativo, una de las hélices debería estar construida con N15
(la vieja) y la otra hélice con N14 (la nueva) y, al centrifugar en
gradiente de densidad esperaríamos obtener dos bandas una más densa
correspondiente a la hélice construida con N15 y otra menos densa
sintetizada con N14. El resultado obtenido por Meselson y Stahl
(1958) fue precisamente el esperado para una replicación semiconservativa.
Si
la replicación del ADN de E. coli se ajustará al modelo Conservativo al
centrifugar el ADN de las bacterias después de un generación en medio con N14,
hubieran obtenido dos bandas una de densidad correspondiente al N14 y
otra de densidad correspondiente al N15. Nunca habrían observado, en
este caso, una banda de ADN de densidad intermedia (N14-15).
Bibliografía:
http://es.wikipedia.org/wiki/Experimento_de_Meselson-Stahl
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm
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